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为什么使用CLDN18抗体检测G/GEJ肿瘤样本中的CLDN18.2？
CLDN18抗体可以识别CLDN18亚型-CLDN 18.1和CLDN 18.2。但是当评估G/GEJ肿瘤组织时，染色可确认CLDN18.2的存在，因为2,3：
- CLDN18.1主要在肺腺癌组织中表达，在GC/GEJ中的表达可忽略或不存在3
- CLDN18.2通常存在于胃上皮中，并常在恶性胃组织中保留表达3
样品制备和预分析
适当的标本处理和制备对于确保生物标志物结果的准确性至关重要。1
如何制备CLDN18.2检测样品
Takeshi Kuwata, MD, PhD
样品制备
指南建议根据生产商的建议对组织处理器进行日常维护，并对处理液进行严格的质量维护，包括福尔马林的pH值/纯度和酒精的水污染。1
冷缺血时间
根据现行指南，冷缺血时间应限制在≤60分钟。1
固定
指南提供了有关样品固定维度和持续时间的建议。1
关键维度1
组织应完全浸没在固定液中
确保固定液体积与组织质量之比不小于4:1，最佳比例为10:1
石蜡应在<60°C下熔化
样本应含有足够的肿瘤组织用于分析
关键持续时间1
为了确保稳定性，应将组织在10%中性磷酸盐缓冲福尔马林（pH 7.0）中固定至少6小时，但不超过24-36小时。
如果组织脂肪含量较高，固定可能需要长达48小时。
组织固定不理想1
为了最大限度地减少可能干扰准确评分的染色假象，优化免疫组织化学检测前的流程非常重要。
如果固定不理想，会造成细胞质发红，可能会干扰膜性评分的准确度。
标本制备2
常规处理、福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织适用于IHC检测。
细针抽吸（FNA）标本、细胞学标本或转移性骨病变不符合CLDN18染色的条件
组织切片厚度3 μm-6 μm*
染色前，应将切片在室温下完全干燥（风干）或在60℃下离线烘烤（烘箱烘烤）60分钟。*
* CLDN18专用。
储存条件1
为确保标本的完整性，储存区域应具备以下条件：
干燥
无虫害
室温（18℃-25℃）
检测
用于评估CLDN18.2 IHC表达的选项
许多检测、抗体和平台可用于评估CLDN18.2表达。检测和抗体包括VENTANA CLDN18（43-14A）IVD检测、LSBio PathPlus™ CLDN18抗体和Abcam重组抗Claudin 18抗体（43-14A）。平台选项包括BenchMark ULTRA、Dako Autostainer和Leica Bond。4
该抗体/检测和平台的列表并不详尽，并且上述检测并非FDA批准的现行伴随诊断。请使用合适的检测方法来指导临床决策。
如何检测CLDN18.2
Christoph Röcken, MD
选择合适的对照品
合适的对照品对于检测G/GEJ肿瘤样本中的CLDN18.2至关重要。以下是关于选择和使用对照品的一些要点。2,5
验证对照品
指南建议实验室在将免疫组织化学检测用于临床服务之前对其进行验证和/或确认，并应包括阳性、阴性和临界组织，以反映试验的预期用途。5
组织对照品可通过供应商购买：
对照测试
- 建议使用最佳对照测试，包括阳性和阴性2
- 胃粘膜肠化生组织是合适阳性和阴性对照品的例子，其具有以下特点2：
- 正常胃上皮细胞中呈强膜性染色
- 化生区上皮细胞呈弱至中度膜染色
- 固有层、淋巴细胞、平滑肌、血管和外周神经无染色
- 如果阳性对照品未能证明染色，则应认为检验标本的结果无效。2
- 已知阳性组织对照品应仅用于监检试剂和仪器的性能，而非确定检测样品特异性诊断的辅助手段。2
CAP PPMPT，美国病理学家协会精准医疗预分析项目组；CLDN，claudin；CLDN18.1，claudin 18亚型1；CLDN18.2，claudin 18亚型2；FDA，美国食品药品监督管理局；G/GEJ，胃/胃食管交界处；IHC，免疫组织化学；IVD，体外诊断。
平台和抗体性能特征
在一项研究中，评估了三种CLDN18抗体和IHC染色平台在27个全球实验室队列中的重现性和可比性4,*,†：
- VENTANA CLDN18（43-14A）IVD检测的分析性能（准确度、灵敏度和特异性）>95%，并且与共识参考结果相比，在27个实验室中具有重复性4
- 当在Dako或Leica平台上染色时，LSBio抗体的分析性能与VENTANA（43-14A）IVD试验相当4
- LSBio抗体的染色具有重复性4
*所研究的抗体包括Roche Tissue Diagnostics的VENTANA CLDN18（43-14A）IVD检测、LSBio的PathPlus™ CLDN18抗体和Novus Biologicals的Claudin-18抗体。平台包括BenchMark ULTRA、Dako Autostainer和Leica Bond。4
†通过中心病理学审查确定每个样本所有抗体的一致性参考评分。CLDN18.2阳性定义为≥=75%的肿瘤细胞表达中等至强（≥2+）CLDN18膜染色。因此，要求参与研究的病理学家提交一份阳性/阴性报告以及染色细胞百分比的估计。将实验室提交的IHC评分与参考共识评分进行比较，如果阳性/阴性以及百分比结果不同，则认为不一致。通过统计分析进行比较，并采用85%（≥0.85）的可接受标准。4
本能反应性检测可以改善患者结局
生物标志物检测延迟可能使临床结局恶化
指南建议在诊断时，如果确定或疑似有转移性胃癌，应进行所有可用、可操作的生物标志物检测，如HER2。6
ESMO指南建议对CLDN18.2进行检测。6
任何新的生物标志物都应与其他生物标志物同时进行检测，以便及时报告结果。6,7
本能反应性检测可加速靶向治疗的启动，改善临床结局
在包括不同癌症类型的晚期癌症患者队列（n=1423）中，在诊断时实施本能反应性检测方案可改善总生存率。7
12个月时的OS
我们已经看到了本能反应性检测改善患者结局的证据。病理学家提倡在诊断时检测所有流行的、可操作的生物标志物，这一点至关重要。
Matteo Fassan, MD, PhD
参考文献：1. Compton CC, Robb JA, Anderson MW, et al. Preanalytics and precision pathology: pathology practices to ensure molecular integrity of cancer patient biospecimens for precision medicine. Arch Pathol Lab Med 2019;143(11):1346-63. 2. Ventana CLDN18 (43-14A) assay [package insert]. Mannheim, Germany: Roche Diagnostics GmbH. 3. Sahin U, Koslowski M, Dhaene K, et al. Claudin-18 splice variant 2 is a pan-cancer target suitable for therapeutic antibody development. Clin Cancer Res 2008;14(23):7624-34. 4. Jasani B, Schildhaus HU, Taniere P, et al. Global ring study determining reproducibility and comparability of CLDN18 testing assays in gastric cancer. Poster presented at: ESMO Targeted Anticancer Therapies Congress; March 6-8, 2023; Paris, France. 5. College of American Pathologists. IHC assays-New evidence-based guideline for analytic validation(04-01-2014). https://documents.cap.org/documents/ihc-validation-webinar-handout.pdf. Accessed 03-30-2023. 6. ESMO Gastric Cancer Living Guidelines(08-2023). https://www.esmo.org/living-guidelines/esmo-gastric-cancer-living-guideline/diagnosis-pathology-and-molecular-biology/article/diagnosis-pathology-and-molecular-biology. Accessed 08-16-2023. 7. Piening B, Bapat B, Weerasinghe RK, et al. Improved outcomes from reflex comprehensive genomic profiling-guided precision therapeutic selection across a major US healthcare system [Abstract 6622]. J Clin Oncol 2023;41(Suppl 16).